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Facultad de Ciencias Básicas, Escuela de Ciencias Químicas, Programa Química de Alimentos, Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Tunja 27 agosto – 2009
Laura María Ibarra 1134132, Eliana Maritza Tulcán 1134203 María Lourdes Lourdes Quintero Quintero 1134119
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Profesora. Ruby Marques
The carbohydrates are distributed widely in vegetables and animals in which it has structural participation, functional and metabolic. The carbohydrates are classified depending on I number of atoms of carbon that have and the aldehic function or cetonic, these as well confer the base to him for majority of reactions used for their identification. carbono (pentosa) o de seis átomos de carbono (hexosa), INTRODUCCIÓN Los carbohidratos son polih lihidroxial ialdehido idos y polihidroxicetonas derivados de alcoholes. Se clasifican de acuerd acuerdo o al número número de carbon carbonos os que contiene contiene la cadena cadena (triosas, tetrosas, pentosas, etc.) y de acuerdo al número de monó monóme mero ross que que pose posea a la moléc molécul ula a (mon (monos osac acár árid idos os,, disa disacá cárid ridos os,, polis polisac acár árid idos os,, etc. etc.). ). Los Los carb carboh ohid idra ratos tos,, cono conoci cido doss gene genera ralm lmen ente te como como azuc azucar ares es,, son son de los compuestos orgánicos más abundantes en la naturaleza, la mayoría de ellos proceden de las plantas y solo unos cuantos son de origen animal. Las propiedades químicas y físicas de los carbohidratos varían de acuerdo a su composición, por lo que se han dise diseña ñado do prue prueba bass espe especí cífi fica cass para para su detec detecci ción ón y cuant cuantific ificaci ación, ón, además además de recono reconocer cer si un compue compuesto sto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacárido tipo aldosa o cetosa, si es fácilmente oxidable o no, es decir si es un AZÚCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco átomos de
si es disacárido o polisacárido.
Para la determinación cualitativa se realizó las siguientes pruebas: 1. PRUEBA DE MOLISH CARBOHIDRAT OS Sacarosa Glucosa Arabinosa Xilosa Albúmina
mL CH
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
H2SO4 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
2. PRUEBA DE BENEDICT CARBOHIDRAT O
REACTIVO DE BENEDICT (mL)
1.0 Glucosa 1.0 Fructosa 1.0 Lactosa 1.0 Almidón 1.0 Sacarosa Los tubos se sometieron a calentamiento en baño termostatado a 98°C, hasta que se observe un cambio de color. 3. PRUEBA DE BARFOED Se tomó 1mL de glucosa, fructosa, lactosa, almidón y sacarosa en diferentes tubos y se agregó a cada uno 1mL de reactivo de Barfoed. Al cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. 4. PRUEBA DE BIAL CARBOHIDRAT mL CH Reactivo de OS Bial (mL) 1.0 1.0 Glucosa 1.0 1.0 Fructosa 1.0 1.0 Xilosa 1.0 1.0 Arabinosa 1.0 1.0 Sacarosa Los tubos se sometieron a baño termostatado a 98°C. Al cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. 5. PRUEBA DE SELLIWANOFF CARBOHIDRAT mL CH OS 1.0 Glucosa 1.0 Fructosa 1.0 Sacarosa 1.0 Lactosa
Reactivo Sellivanoft (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0
Los tubos se sometieron a baño termostatado a 98°C. Al cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. 6. PRUEBA DE LUGOL CARBOHIDRAT mL CH Lugol OS (mL) 1.0 0.5 Glucosa 1.0 0.5 Fructosa 1.0 0.5 Sacarosa 1.0 0.5 Lactosa Se observó el cambio de color inmediatamente se agregó. 1. PRUEBA DE MOLISH Sacaro Glucos sa a
Arabino sa
2. PRUEBA DE BENEDICT Sacaros Arabino Glucosa a sa
3. PRUEBA DE BARFOED Sacaros Arabino Glucosa a sa
Xilosa
Albúmi na
Xilosa
Albúmin a
Xilosa
Albúmi na
indican el número de átomos de carbono y la presencia de grupos funcionales en cada uno.
4. PRUEBA DE BIAL Sacaros Glucosa a
Arabino sa
5. PRUEBA DE SELLIWANOFF Sacaros Glucosa Arabino a sa
6. PRUEBA DE LUGOL Sacaros Glucosa Arabino a sa
Xilosa
Albúmi na
Xilosa
Albúmi na
Xilosa
Albúmi na
Para el reconocimiento y diferenciación de carbohidratos se realizaron cinco pruebas cualitativas o coloreadas, las cuales
1. PRUEBA DE MOLISH Esta prueba permite evidenciar los derivados furfúricos que se obtienen por deshidratación de los glúcidos. Esta reacción produce un anillo violeta, que al ser delgado indica baja concentración de carbohidratos y si es grueso alta concentración de carbohidratos. El H 2SO4 concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan luego con α-naftol sulfonado originando un complejo purpura. Esta reacción es general para los hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico concentrado. Para ésta prueba, los tubos que contenían glucosa y arabinosa presentaron un anillo color fucsia y violeta, respectivamente, evidenciando una prueba positiva para Molish. Para el caso de la glucosa se formo un hidroxifurfural y con la arabinosa se formó un furfural. Los tubos que contenían sacarosa, xilosa y albúmina son negativos, debido a que esta es una reacción para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono; en el caso de la sacarosa no reaccionan porque esta prueba también diferencia monosacáridos de polisacaridos, y este carbohidrato es un disacárido unido por un enlace glucosídico; y la albúmina porque es una proteína. La xilosa no reaccionó posiblemente debido a la posición α del grupo hidroxilo del carbono 2.
2. PRUEBA DE BENDICT Esta reacción es específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O), que se evidencia por el cambio de color de azul a rojo, verde o azul claro, siendo en los tres casos positiva la prueba. Esto se pudo comprobar con los resultados positivos para la glucosa y fructosa. La fructosa que es capaz de dar positivo, lo que ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se tautomeriza (pasando por un intermediario enólico) a glucosa (que es capaz de reducir al ion cúprico). Para las pruebas con lactosa, almidón y sacarosa (enlace α(1 1)O), resultan negativas puesto que sus OH anoméricos están siendo utilizados en el enlace glucosídico restándole reactividad a la molécula. Estos azucares tornaron color azul claro y verdoso, respectivamente. →
3. PRUEBA DE BARFOED Es una reacción que permite diferenciar monosacáridos de disacáridos reductores, aunque algunos disacáridos (los
reductores) dan positiva la reacción, pero con más tiempo de calentamiento; en la reacción se forma el gluconato de cobre o gluconato cúprico que es una sal orgánica, precipitándose el oxido cuproso de color rojizo y la solución sobrenadante es agua. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico (3+) a oxido cuproso (2+), el reactivo tiene acetato cúprico y ácido acético. Al agregar el reactivo toma una coloración azul intensa, y al someter a calentamiento torna rojo, verde o azul intenso lo que indica positivo para Barfoed, esta coloración depende del grupo al que este unido al carbohidrato. En el caso de los carbohidratos empleados: Lactosa, almidón y sacarosa la reacción resulto positiva, puesto que corresponden a disacáridos. En el caso de la glucosa y fructosa la prueba es negativa puesto que estos carbohidratos son monosacáridos. 4. PRUEBA DE BIAL Esta reacción diferencia las pentosas (glúcidos de 5 carbonos) de las hexosas (glúcidos de 6 carbonos). Cuando se calientan pentosas con HCl se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar una coloración verde azul. La reacción no es específica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce hidroximetilfurfural que también reacciona con orcinol dando complejos coloreados. En las pruebas realizadas, reaccionó primero la Xilosa y la arabinosa puesto que corresponden a pentosas, a diferencia de la glucosa, fructosa y sacarosa que son hexosas y reaccionaron mas tarde.
que se genera es debido a esta introducción, el cual se pierde cuando es calentado y se recupera cuando vuelve a temperatura ambiente. •
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5. PRUEBA DE SELLIWANOFF Esta reacción diferencia las cetosas (glúcidos con función cetona en carbono 2) de las aldosas (glúcidos con función aldehído en carbono 1), dando positiva para cetosas si torna color rojo y positiva para las aldosas si torna rosa tenue. En el caso de la fructosa esta prueba resulta positiva, puesto que es casi exclusiva para identificarla y además se trata de una cetosa que contiene 6 átomos de carbono. Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo. Se debe cuidar de calentar excesivamente la muestra que se e stá estudiando.
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6. PRUEBA DE LUGOL Esta prueba permite identificar polisacaridos. Se empleó el almidón, en donde se emplea yodo el cual se introduce entre las espiras de la molécula en la hélice de la amilosa. El color
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Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre, darán positivas reacciones que involucren la participación de grupos aldehídos o cetonas, llamándose azucares reductores, debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. La prueba de Molish evidencia la presencia de monosacáridos como lo son la glucosa y arabinosa, generando un anillo color violeta. La prueba de Benedict identifica azúcares con grupo reductores libres (C=O), que en la experiencia resultaron positivos para la glucosa y la fructosa con grupos reductores libres. La prueba de Barfoed identifica monosacáridos de disacáridos reductores, en el caso de la lactosa, almidón y sacarosa resulto positivo debido a que son disacáridos con grupos reductores libres. La prueba de Bial diferencia pentosas de hexosas, como son el caso de la xilosa y arabinosa positivas para pentosas y fructosa, glucosa y sacarosa positivas para hexosas. Las pentosas se evidencian de color amarillo y las hexosas de color verde. La prueba de Selliwanoff diferencia cetosas de aldosas, siendo positiva para la fructosa, dado que es una prueba casi exclusiva para identificar este monosacarido. La prueba de lugol, identifica polisacáridos puesto que el almidón fue el único polisacárido que se empleo, la prueba resultó positiva. BOHINSKI, Robert C. 1992. Bioquímica. Fondo educativo interamericano. S.A. México.
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MERTZ, Edwin T. 1971. Bioquímica. Cultural, S.A. México.
Publicaciones
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http://www.dietasana.net/hidrcarb.html
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http://www.xdocs.com/doc/2407201/GuiaBioquimica
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es.wikipedia.org/wiki/Reacción_de_ Benedict
