Monoclonal Mouse

Transcript

FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD31, Endothelial Cell Klon JC70A Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR610 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD31, Endothelial Cell, klon JC70A, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało wstępnie znakuje komórki śródbłonka i jest przydatne w identyfikacji łagodnych i złośliwych nowotworów pochodzenia naczyniowego, w tym mięsaków naczyniowych (1, 2). Dodatkowo to przeciwciało jest użyteczne w oznaczaniu naczyń podczas określania angiogenezy w kilku typach guzów (3–5). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu PECAM-1 (cząsteczka adhezyjna płytki/komórki śródbłonka 1) (6) Streszczenie i informacje ogólne CD31 jest jednołańcuchowym białkiem transbłonowym typu 1 o masie cząsteczkowej ok. 135 kDa, należącym do nadrodziny immunoglobulin. W ludzkiej surowicy zostały wykryte wersje alternatywnych splotów CD31, zawierające formę wyraźnie pozbawioną domeny transbłonowej, ale z końcowym łańcuchem cytoplazmatycznym (6). CD31 wykazuje wiązanie zarówno w sposób homofilowy jak i heterofilowy. Ligandy heterofilowe składają się z glikozoaminoglikanów siarczanu heparyny, heparyny i integryny avb3. CD31 odgrywa rolę we wzajemnym przyleganiu sąsiadujących komórek śródbłonka oraz leukocytów i komórek śródbłonka. Wiązanie CD31 do powierzchni leukocytów prowadzi do zwiększenia aktywności funkcji integryn leukocytu. Diapedeza leukocytów w śródbłonku polega na homofilowych interakcjach CD31. Dodatkowo interakcja heterofilowa CD31 odrywa oddzielną rolę w migracji monocytów w podśródbłonkowej warstwie podstawnej (6). CD31 podlega ekspresji na wszystkich ciągłych śródbłonkach, w tym tętnic, tętniczek, żyłek, żył i naczyń włosowatych innych niż zatoki naczyniowej. Nie podlega ekspresji na nieciągłym śródbłonku np. miazgi czerwonej śledziony. Dodatkowo CD31 podlega rozmytej ekspresji na powierzchniach megakariocytów, płytek krwi, komórkach szpiku, naturalnych komórkach cytotoksycznych i niektórych podgrupach komórek T oraz prekursorów komórek B (6). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do użycia monoklonalne przeciwciała mysie są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Klon: JC70A (1). Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Preparat z błon komórkowych komórek śledziony pacjenta chorego na białaczkę włochatokomórkową (1). Swoistość Przeciwciała Anti-Human CD31, Endothelial Cell, klon JC70A, zostały zdefiniowane jako anty-CD31 podczas konferencji Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens (5. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty) (7). Badania rozpoznanego epitpu wykazały, że mieści się on w zakresie domeny pozakomórkowej 1 (6). W testach Western Blot preparatów z błon komórkowych z komórek śledziony z dużą zawartością antygenu lub z prawidłowych płytek, przeciwciało znakuje prążki odpowiednio 100 kDa i 130 kDa, które następnie odpowiadają klasycznemu CD31. Mniejszy prążek 100 kDa zaobserwowano z preparatem śledzionowym może być wynikiem proteolitycznego rozkładu lub różnic w glikozylacji (1). Środki ostrożności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. (117312-001) IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 1/3 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach 4 µm. Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8002/8004). Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych przy użyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja użytkownika aparatu PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8002/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97°C przez 20 (±1) minut; ochłodzić do 65°C. Przepłukać skrawki rozcieńczonym roztworem o temperaturze pokojowej EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8002). Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). W oprogramowaniu Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym aparacie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez patologów z różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić się, że działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okrężnicę i migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu W komórkach znakowanych przez przeciwciała odczyn występuje przede wszystkim w błonie komórkowej; ponadto występuje słabszy odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciała znakują komórki śródbłonka w różnych tkankach, w tym śródbłonek kapilar kłębuszków nerkowych i śródbłonek naczyń odżywczych. Ponadto przeciwciała znakują megakariocyty oraz sporadycznie komórki plazmatyczne w szpiku kostnym (1). W okrężnicy komórki śródbłonka dużych naczyń wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki B strefie płaszcza migdałków wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała znakują komórki śródbłonka rozmaitych łagodnych i złośliwych zmian naczyniowych. W (10/10) (1) i 6/7 (2) przypadków śródbłoniaków krwionośnych nabłonkowatych przeciwciała znakowały złośliwe komórki śródbłonka naczyń. Ponadto przeciwciała znakowały 17/17 (2) i 3/3 (1) naczyniaki, 3/3 naczyniaki nabłonkowe, 1/1 śródbłoniak naczyń włosowatych (2), 3/3 naczyniakowłókniaki, 2/2 naczyniaki skóry z rogowaceniem, 1/1 naczyniak pericytarny, 1/1 przyzwojak niechromochłonny, 3/3 śluzaki przedsionkowe i 2/2 wodniaki torbielowate (1). Ponadto przeciwciała znakowały komórki śródbłonka w tkankach nowotworowych z angiogenezą (3-5). W naczyniakach chłonnych obserwowano wyniki rozbieżne: donoszono o znakowaniu przez przeciwciało 8/8 (2) i 0/4 (1) przypadków. Podobna rozbieżność występowała w przypadku kłębczaków: przeciwciała znakowały 2/2 (1) i 0/7 (2) przypadków. Nie zaobserwowano znakowania w jednym przypadku torbieli nabłonkowatej limfatycznej i odmy tkankowej (1); ujemne wyniki otrzymano również w 30 przypadkach łagodnych i 4 złośliwych nowotworów osłonek nerwowych, 11 włókniaków skóry, 28 guzowatych włókniakomięsaków skóry, 6 mięśniaków gładkich, 3 mięśniakomięsaków gładkich, 3 nowotworów wielkokomórkowych z fibroblastów (2), 52 mięsaków prążkowanokomórkowych, 16 guzów drobnokomórkowych z komórek okrągłych, 11 nerwiaków niedojrzałych, 23 guzów Wilmsa, 20 glejaków siatkówki, 13 nerwiaków esthesioneuroblastoma i 7 złośliwych chłoniaków drobnokomórkowych nieszczelinowatych. Ponadto komórki wrzecionowate w 17 przypadkach mięsaków Kaposiego były konsekwentnie niereaktywne (8). (117312-001) IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 2/3 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Parums DV, Cordell JL, Micklem K, Heryet AR, Gatter KC, Mason DY. JC70: a new monoclonal antibody that detects vascular endothelium associated antigen on routinely processed tissue sections. J Clin Pathol 1990;43:752-7. 2. DeYoung BR, Swanson PE, Argenyi ZB, Ritter JH, Fitsgibbon JF, Stahl DJ, et al. CD31 immunoreactivity in mesenchymal neoplasms of the skin and subcutis: Report of 145 cases and review of putative immunohistologic markers of endothelial differentiation. J Cutan Pathol 1995;22:215-22. 3. Engel CJ, Bennett ST, Chambers AF, Doig GS, Kerkvliet N, O’Malley FP. Tumor angiogenesis predicts recurrence in invasive colorectal cancer when controlled for Dukes staging. Am J Surg Pathol 1996;20:1260-5. 4. Fox SB, Leek RD, Bliss J, Mansi JL, Gusterson B, Gatter KC, et al. Association of tumor angiogenesis with bone marrow micrometastases in breast cancer patients. J Natl Cancer Inst 1997;89:1044-9. 5. Giatromanolaki A, Koukourakis M, O’Byrne K, Fox S, Whitehouse R, Talbot DC, et al. Prognostic value of angiogenesis in operable non-small cell lung cancer. J Pathol 1996;179:80-8. 6. Muller WA. AS9. CD31 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 362-4. 7. Fornelli CS, George F, Sampol J, van Agthoven AJ. E6.6. Biochemical analysis of endothelial antigens recognized by workshop mAb. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 1791-5. 8. Nicholson SA, McDermott MB, DeYoung BR, Swanson PE. CD31 immunoreactivity in small round cell tumors. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2000;8:19-24. Objaśnienie symboli (117312-001) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 3/3 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17