Prezentacja-dr Dariusz Jan Smoliński

Transcript

Dariusz J. Smoliński Zakład Biologii Komórki UMK Toruń U snRNP U 1 G GG U2 U 1 U6 U5U2 U 1 DNA U6 U4 U5 U6 U U5 U4 1 U2 U6 U5 U2 Jądro U2 U4 Transkrypcja miRNA Ko-transkrypcyjne modyfikacje Cytoplazma Eksport Synteza białek inkubacja BrUTP pre-mRNA i mRNA Transkrypc ja BrU Zienkiewicz et al. Protoplasma 2006 Zienkiewicz et al. Protoplasma 2008 BrU 1-5 min Zienkiewicz et al. Sex Plant Rep 2008 BrU Piecinski et al. Sex Plant Rep 2008 BrU Kołowerzo et al. Protoplasma 2009 Zienkiewicz et al. J Exp Bot 2011 BrU Niedojadlo et al. Exp Cell Res 2011 Smolinski & Kołowerzo Chromosoma 2012 BrU BrU BrU 15 min – 6h Niedojadlo et al. Planta 2012 a, b pre-rRNA , rRNA, snRNA Cy3 Smoliński et al. Protoplasma 2007 Cy3 Cy3 Cy3 Cy3 Cy3 Niedojadlo et al. Planta 2012 c Dig Smolinski et al. Chromosoma 2012 5’ Czapeczka Br UU Br Br Br U U U Sonda Tor 17 T T T T TT T A A A A A A A 3’ Poli(A) Olympus Zeiss Nikon Eppendorf/Nikon 5-Ethynyl Uridine (EU) Alexa Fluor 488 Azide Planowane badania proof of concept w ramach Euro-BioImaging Poland oraz w Centrum Nowoczesnych Technologii UMK Szlak dojrzewania snRNP U2 snRNA CB CB Cytoplazma CB CB Nu Jądro Jądro CB CB Transkrypcja genów U snRNA Transkrypcja genów U snRNA G ? Dodanie rdzenia białek Sm G U2 (10 nm) m3G snRNA (15 nm) CB G GG G Eksport G G CB ? Utworzenie czapeczki m3G Kołowerzo et al. Protoplasma 2009 Smoliński et al. Histochem Cell Biol 2011 Smoliński & Kołowerzo Chromosoma 2012 Sm U2 merge m3G snRNA Sm Sm U1 merge m3G snRNA Sm Sm m3G snRNA merge Sm (15 nm) U2 snRNA (10 nm) Smoliński et al. Histochem Cell Biol 2011 Mikroiniekcja U2 snRNA komórki CHO pętla nóżka fluorofor wygaszacz budowa molecular beacon cel molecular beacon D2 E D3 F B/B’ G D1 m7G m7G D2 E D3 F B/B’ G D1 m7G D2 E D3 F B/B’ G D1 m3G m7G CB D2 E D3 F B/B’ G D1 Jądro komórkowe CB m7G m7G cytoplazma D2 E D3 F B/B’ G D1 D2E D3 F B/B’ G D1 D2 E D3 F B/B’ G D1 D2 E D3 F B/B’ G D1 mRNA w ciałach Cajala Smoliński & Kołowerzo Chromosoma 2012 Transkrypcja Jądro DNA pre-mRNA Transkrypcja ekson intron Sekwencje DNA bakteriofaga MS2 kodująca pętle „MS2 Binding Site” (MBS) dołączamy do sekwencji genu który chcemy zbadać Kiedy syntetyzowany jest RNA ta sekwencja tworzy strukture pętli i nóżki (stem-loop) do której może się przyłączyć z wysokim powinowactwem białko kapsydu bakteriofaga (MCP). ;-) Dziękuję za uwagę Dariusz Jan Smoliński Zakład Biologii Komórki UMK Toruń