Transcript
1
Ralstonia solanacearum test serologiczny
Ralstonia solanacearum ImmunoStrip Test Test pozwala na szybką i łatwą identyfikację w warunkach polowych zakażenia tkanki roślinnej bakterią Ralstonia solanacearum (Rs), czynnikiem sprawczym „południowego więdnięcia”, choroby Moko bananów oraz choroby zwanej brunatną zgnilizną ziemniaka, bądź śluzakiem roślin psiankowatych - według polskiego nazewnictwa. Test można stosować dla kultur bakteryjnych oraz tkanek roślinnych. Patogen jest najczęściej lokalizowany w korzeniu, bulwach, łodygach oraz ogonkach liściowych. Do testu można również wykorzystać liście roślin. Test nie jest zalecany do badań roślin z rodzaju Helleborus, należących do rodziny Ranunculaceae. Wewnętrzne dane pokazują, że test generuje fałszywie pozytywne wyniki podczas testowania korzenia oraz materiału korony roślin z rodzaju Helleborus. Proponowany test paskowy jest akceptowaną przez USDA-APHIS metodą detekcji bakterii Ralstonia solanacearum (R3B2 - race 3 biovar 2), wymienianej jako potencjalny patogen bioterroryzmu. Wykonanie testu nie wymaga żadnych urządzeń analitycznych. Wynik jest znany już po upływie kilkunastu minut. Rośliny gospodarze Ralstonia solanacearum poraża ponad 200 gatunków roślin, w tym zarówno jednojak i dwuliścienne, jednoroczne, drzewa oraz krzewy. Wśród roślin uprawnych można wymienić ziemniak, pomidor, bakłażan, banan, pelargonię, imbir, tytoń, słodki pieprz oraz oliwkę. Objawy zakażenia Bakteria glebowa Ralstonia solanacearum wnika do rośliny w miejscu uszkodzenia korzenia oraz zranień w łodydze, po czym atakuje wiązki przewodzące w warunkach podwyższonej temperatury, a następnie rozprzestrzenia się i rozpoczyna kolonizację ksylemu. Objawy infekcji widoczne ponad ziemią u młodych roślin to więdniecie liści od podstawy ku wierzchołkowi, a w przypadku roślin o dużych liściach obserwuje się jednostronne więdniecie liścia. Zainfekowane liście żółcieją i więdną, a obszar pomiędzy żyłkami na liściu brązowieje. Wewnętrzne objawy zakażenia bakterią to jasnobeżowe do żółtobrązowych przebarwień w obrębie tkanki przewodzącej. W miarę postępu choroby obserwuje się długie ciemnobrązowe do czarnych smugi na przekroju tkanki przewodzącej łodygi, a następnie ciemnobrązowe przebarwienie rdzenia oraz kory łodygi. Gdy zasiedlenie tkanek przez patogen jest bardzo silne po złamaniu lub przecięciu łodygi z wiązek naczyniowych wydostaje się biała, śluzowata masa bakterii. Novazym Polska ul. Żywokostowa 23, 61-680 Poznań. tel. +48 61 610 39 10 , fax. +48 61 610 39 11, e-mail:
[email protected], www.novazym.com Copyright Novazym Polska 2008
2
Ralstonia solanacearum test serologiczny Przygotowanie próbki: Próbka może być przygotowana z liścia, ogonka lub łodygi rośliny wykazujących objawy infekcji (więdnięcie). Fragment tkanki należy zawiesić w buforze ekstrakcyjnym zawartym w woreczku testowym w stosunku 1:20 w/v, co odpowiada 0,15 g tkanki. W przypadku braku możliwości zważenia próbki, należy pobrać taką ilość tkanki, która w przybliżeniu odpowiada wielkości orła na monecie 1 zł. Pobierając materiał z łodygi należy wyciąć dwa fragmenty tkanki z dwóch pierwszych międzywęźli korony. Łodyga może zostać pocięta na drobniejsze fragmenty. Uwaga: Nie należy stosować większych próbek. Przy pobieraniu każdej próbki należy używać nowego jednorazowego skalpela lub innego sterylnego narzędzia. Wykonanie testu : 1. Ostrożnie odciąć górną część woreczka z buforem ekstrakcyjnym BEB1. 2. Umieścić próbkę w woreczku, a następnie rozcierać tak, aby jak najlepiej zmiażdżyć tkankę. Uwaga: Jeden woreczek umożliwia zbadanie tylko jednej próbki. 3. W woreczku z roztartą próbą umieścić pionowo pasek testowy, tak, aby nie więcej niż 0,5 cm końcówki paska było zanurzone w roztworze. Pasek powinien pozostać w woreczku przez 30 min. 4. Odczytać wynik po 30 min inkubacji paska w roztworze z próbą. Test można wykonać również na hodowli bakteryjnej Za pomocą wykałaczki należy pobrać kolonię bakteryjną z płytki hodowlanej. Końcówkę wykałaczki wprowadzić do probówki zawierającej 300 µl buforu ekstrakcyjnego BEB1 i dokładnie wymieszać. Wykorzystując hodowlę komórkową zawiesina komórek powinna być w stężeniu ≥ 106 cfu/mL. Wówczas należy podać 50 µl zawiesiny komórek do probówki zawierającej 250 µl buforu ekstrakcyjnego BEB1.
Novazym Polska ul. Żywokostowa 23, 61-680 Poznań. tel. +48 61 610 39 10 , fax. +48 61 610 39 11, e-mail:
[email protected], www.novazym.com Copyright Novazym Polska 2008
3
Ralstonia solanacearum test serologiczny Interpretacja wyników:
W przypadku poprawnie wykonanego testu musi pojawić się linia kontrolna. Pozytywny wynik testu: widoczne dwie linie - linia kontrolna (wyżej) i linia testowa (poniżej), obie w kolorze od czerwonego do purpurowego. Wynik negatywny testu: widoczna jedynie linia kontrolna. UWAGA! Jeżeli widoczna jest tylko linia testowa a brak jest linii kontrolnej należy test powtórzyć. Należy unikać bocznego przepływu buforu przez pasek testowy. Pasek należy zanurzyć w buforze do linii kontrolnej wskazywanej przez strzałki na pasku testowym. Przechowywanie: Testy należy przechowywać w suchym miejscu w temp +4°C. Data ważności: 08.2014
Novazym Polska ul. Żywokostowa 23, 61-680 Poznań. tel. +48 61 610 39 10 , fax. +48 61 610 39 11, e-mail:
[email protected], www.novazym.com Copyright Novazym Polska 2008
